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通用：電鏡固定液與組織樣本建議體積比為20:1，樣本保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰

1、動(dòng)物、植物組織樣本要求

① 請(qǐng)盡快固定。動(dòng)物組織最好在離體后1min內(nèi)浸入電鏡固定液，開(kāi)始固定。

② 非灌注的組織，厚度不超過(guò)4mm，請(qǐng)用恰當(dāng)方式（比如切寬薄片）體現(xiàn)位置和層次關(guān)系。

③ 請(qǐng)用鋒利的薄刀片切組織，朝一個(gè)方向劃，不要來(lái)回切割，不要擠壓、拉扯。

④ 含有食物殘?jiān)?、大量血液或其它黏附物的組織，請(qǐng)用生理鹽水漂洗，再投入電鏡固定液。

⑤ 請(qǐng)保證電鏡固定液量充足，固定液和組織的體積比不小于20:1。

⑥ 最好在4℃的電鏡固定液中浸泡，注意嚴(yán)禁結(jié)冰（太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使組織結(jié)冰）。

組織尺寸和容器關(guān)系（只裝一個(gè)的參考標(biāo)準(zhǔn)）：

· 芝麻或綠豆大?。ㄈ缧∈竽I上腺）：請(qǐng)用1.5ml EP管

· 黃豆大小（小鼠腎臟）：請(qǐng)用5ml離心管

· 鋪展面積類(lèi)似蠶豆大小的組織片：請(qǐng)用平底的25ml廣口瓶

· 每個(gè)容器含有N個(gè)組織時(shí)：容器體積要適當(dāng)增大，組織不要相互擠壓變形

注意：

① 動(dòng)物組織容易發(fā)生自溶現(xiàn)象。固定不及時(shí)，組織結(jié)構(gòu)極有可能破壞，如果離體組織需要稱(chēng)重，盡量在低溫環(huán)境進(jìn)行，并及時(shí)固定；

② 動(dòng)物組織塊最好快速切取一分鐘內(nèi)把組織（樣品）放入電鏡固定液中。不要超過(guò)黃豆大小，否則固定液滲透困難，中心組織固定不好，結(jié)構(gòu)破壞，植物組織最好切割成1cm左右長(zhǎng)度的細(xì)條，便于后續(xù)取材確定方向，所有植物樣品如有條件盡量抽真空致沉底保證樣品浸泡在電鏡固定液中；

③ 特殊要本需要定位（見(jiàn)表格《透射電鏡需要進(jìn)行半薄定位的樣本匯總》）的，需要盡量取到目的位置，個(gè)別需要確定取材方向（比如肌肉）的，提供的樣本能讓分清橫縱方向，取材選擇部位要準(zhǔn)確可靠，確保每塊材料都是要觀察的部位。

2、細(xì)胞樣本要求

① 盡量用60mm的皿培養(yǎng)細(xì)胞，用胰酶消化(1min，如果部分貼壁細(xì)胞短時(shí)間消化不下來(lái)可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間)或者細(xì)胞刮（不建議用細(xì)胞刮取，除非觀察細(xì)胞之間的“連接”結(jié)構(gòu)）的方式收集于離心管中，常規(guī)離心收集細(xì)胞（里來(lái)選擇1000rpm*2-5min）；

② 棄去上清液，用吸管沿管壁緩慢加入0.5%戊二醛固定液，重懸細(xì)胞，4℃環(huán)境中靜置5min；

③^★ 將步驟2的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至1.5ml尖底EP管中，高速離心（里來(lái)選擇12000rpm*10min）輕輕棄去上清液，保留沉淀，高速離心離緊后的樣品體積約半顆小米粒大??；

④ 用吸管沿管壁緩慢加入固定液(不可吹散細(xì)胞)，收集后不能及時(shí)送樣，可保存在4℃環(huán)境中；

⑤ 運(yùn)輸條件:放入盛有冰袋的泡沫盒4℃運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室(一定使用1.5ml尖底EP管送樣)。

3、細(xì)菌、真菌樣本要求

① 觀察細(xì)菌內(nèi)部結(jié)構(gòu)：直接將固體培養(yǎng)基上可見(jiàn)菌落整體剜下，連同培養(yǎng)基放于電鏡固定液中，懸浮細(xì)菌等先離心收集，其余處理步驟與細(xì)胞樣本要求完全一致；

② 觀察表面（鞭毛、菌毛、形態(tài)）：參考負(fù)染樣品處理方法（見(jiàn)下方）。

③ 真菌：真菌樣本固定方法較特殊、除真菌固定液均采用電鏡混合固定液外，處理步驟與細(xì)胞樣本要求完全一致。

4、精子樣本要求

① 收集適量精液（大于1ml）置清潔干燥的盤(pán)尼西林小瓶中，放37℃恒溫箱約40min液化后，移至離心管中，1500rpm，離心5min，棄去精漿。

② PBS洗滌兩次，1500rpm，離心5min，離心去上清，可明顯看到沉淀。

③ 用吸管沿管壁緩慢加入約1ml的0.5%戊二醛固定液，輕輕吹打混勻，在4℃環(huán)境中靜置10min。

④ 再用12000rpm，離心10min，棄去上清液，高速離心后的樣品體積不小于半顆小米粒大小。

⑤ 再用吸管沿管壁緩慢加入固定液固定即可（不要吹打混勻），固定液與樣本建議體積比為20:1。

⑥ 收集后不能及時(shí)送樣，可保存在4℃環(huán)境中。

⑦ 運(yùn)輸條件：離心棄固定液后加新的電鏡固定液，轉(zhuǎn)移至4℃保存，放入盛有冰袋的泡沫盒運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室。

5、負(fù)染樣本要求

① 納米材料：制備成懸液，重懸的液體不能是有機(jī)溶劑（比如丙酮、酒精），樣本量不要過(guò)少；

② 細(xì)菌：提供活菌，可以直接連同固體培養(yǎng)基一起送樣，或者提供重懸后的菌液；

③ 外泌體、支原體、衣原體、病毒等：提純后，直接送樣，盡量不要凍存，該類(lèi)樣本需與公司提前預(yù)約。

注意：

① 負(fù)染樣本最好能提供100μL左右的提純樣品；

② 提前與公司確定好時(shí)間，再準(zhǔn)備樣品，放入盛有冰袋的泡沫盒運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，及時(shí)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

③ 建議客戶(hù)來(lái)現(xiàn)場(chǎng)參與采圖；不來(lái)現(xiàn)場(chǎng)采圖客戶(hù)，需要完善《電鏡送樣單》內(nèi)容，注明樣本名稱(chēng)，類(lèi)型，形態(tài)、粒徑和參考圖。

透射電鏡需要進(jìn)行半薄定位的樣本匯總