注：以下所有樣本盡量新鮮！
1、動物組織采集（樣本量盡量保證在綠豆大小，約200mg以上）
① 取材應(yīng)在冰上進行，取材后組織用生理鹽水沖洗干凈，去除血漬和污物，并剔除非研究所需的組織；
② 吸干水漬并切小塊，放入已標記的凍存管中，液氮速凍后，轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
2、貼壁細胞RNA采集樣本（樣本量1*10^8以上）
RNA試劑盒法：
① 用微量移液器將細胞培養(yǎng)液吸除干凈，加入1ml 4℃預(yù)冷PBS溶液，輕搖洗滌；
② 將PBS吸除干凈后，再加入1ml PBS，用細胞刮收集細胞，3000rpm離心10min，棄去上清液，收集細胞沉淀，液氮速凍后轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存；
③ 使用RNA提取試劑盒提取RNA，具體提取方法以試劑盒說明書為準。提取樣本經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
Trizol法：
① 貼壁細胞培養(yǎng)或處理結(jié)束后，去除培養(yǎng)液；
② 每10c㎡培養(yǎng)面積加入1ml Trizol試劑；
③ 用1ml槍頭反復(fù)吹打,使Trizol與細胞充分接觸并消化；
④ 將上述溶液轉(zhuǎn)移到試管中，用一次性注射器（或者槍頭）反復(fù)吹打細胞，直至看不見成團的細胞塊，使溶液呈現(xiàn)清亮且不粘稠的狀態(tài)；
⑤ 經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
3、懸浮細胞RNA采集（樣本量1*10^8以上）
RNA試劑盒法：
① 懸浮細胞培養(yǎng)或處理結(jié)束后，3000rpm，離心10min，去除培養(yǎng)液；
② 收集細胞后，加入1ml 4℃預(yù)冷PBS溶液，輕搖洗滌，3000rpm，離心10min，棄去上清液，收集細胞沉淀，液氮速凍后轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存；
③ 使用RNA提取試劑盒提取RNA，具體提取方法以試劑盒說明書為準。提取樣本經(jīng)氮速凍后轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱。
Trizol法：
① 懸浮細胞培養(yǎng)或處理結(jié)束后，離心收集細胞，去除培養(yǎng)液
② 保留的細胞用PBS快速洗一次，離心除去PBS；
③ 每1×10^6個細胞加1ml Trizol試劑，用一次性注射器進行反復(fù)吹打直至看不見成團的細胞塊，整個溶液呈清亮且不粘稠的狀態(tài)；
④ 經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
4、血液樣本采集
全血樣本(以下方法步驟僅供參考）
哺乳動物需要采集白細胞進行后續(xù)實驗，（具體方法需參考各種分離液試劑說明書）
① 將新鮮全血收集于抗凝管中，上下輕輕顛倒幾次使血液與抗凝劑充分混勻，置于4°C或冰盒中正立放置；
② 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘；
③ 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液；
④ 2400rpm-2700rpm離心5分鐘，棄紅色上清；
⑤ 重復(fù)步驟③和步驟④，直至紅細胞裂解完全，收集細胞沉淀；
⑥ 每1×10^6個細胞加入1ml Trizol試劑，液氮速凍后，轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
5、血清樣本采集（備注：因其RNA豐度很低，PCR可能擴增不出來）
① 用無抗凝劑血清管收集全血樣本，預(yù)留一定空間便于血清分離，置于4°C或冰盒中正立靜置10-20分鐘；
② 3000-3500rpm，離心10-15分鐘，取上清于離心管（RNasefree）中;
③ 將分裝好的血清轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
6、血漿樣本采集（備注：因其RNA豐度很低，PCR可能擴增不出來）
① 將新鮮全血收集于抗凝管中，上下輕輕顛倒幾次使之與抗凝劑充分混勻，置于4°C或冰盒中正立靜置10-20分鐘；
② 3000-3500rpm，離心10-15分鐘，取上清于離心管中;
③ 將分裝好的血漿轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存。
7、菌類（1*10^8 CFU以上的菌體）
液體培養(yǎng)基：
① 挑取單菌落于50ml液體培養(yǎng)基中，適宜溫度培養(yǎng)過夜，并在對數(shù)生長期進行菌體采集；
② 培養(yǎng)好的菌液適量轉(zhuǎn)入合適的離心管中，高速離心收集菌體，棄去上層培養(yǎng)基，用封口膜封口后液氮速凍，轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存，大體積干冰運輸；
固體或半固體培養(yǎng)菌種收集：
① 涂布平板培養(yǎng)的微生物，在菌體生產(chǎn)最旺盛時期刮下，置于1.5或2.0ml的離心管中，迅速液氮速凍。
② -80℃冰箱保存，轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存，大體積干冰運輸。
樣本準備注意事項：
① 小體積的昆蟲類組織，如寄生蜂、螨等，可考慮用RNA保護劑進行樣本收集，RNA保護劑的使用參照試劑說明書；
② 所有直接接觸樣本的試劑、耗材等物品均需要處于無RNA酶（RNasefree）環(huán)境；
③ 肝素會影響下游建庫測序，EDTA不適用于部分成分分析及PCR實驗，采集血液樣本時需根據(jù)檢測需求慎重選擇抗凝劑；
④ RNA樣本提取可采用RNA試劑盒、Tirzol法等，注意RNA樣本的純化，避免多糖多酚、蛋白和其它雜質(zhì)的殘留。提取完成后，提供Nanodrop、AGE或Agilent 2100中一種或多種形式的分析結(jié)果以判斷RNA的完整性、濃度、總量是否滿足需求。寄送TotalRNA的需注明提取所用的方法，如試劑盒或Tirzol法等；
⑤ 樣本標簽勿粘貼在EP管或錫箔紙上，低溫下標簽紙易脫落，建議使用記號筆標記；
⑥ 細胞樣本不建議采用粘稠保護劑保存，否則將無法離心收集存放在保護劑的細胞樣本；
⑦ RNAlater、RNAstore等保護劑在25℃下能穩(wěn)定保存樣本3天，4℃保存樣本7天、-20℃條件下可長期保存樣本。建議用保護劑保存的樣本厚度不超過0.5cm。保護劑不適用于血液和液態(tài)樣本，組織樣本與保護劑的用量至少為1:10，RNAstore不適用于植物樣本保存。（不同保護劑保存時間有差異，具體以保護劑說明書為準）；
⑧ Trizol為裂解液，不適用于組織樣本的保存，細胞除外。當細胞存放在Trizol中需注明每管的細胞數(shù)量。
樣本寄送注意事項：
① 樣本需要使用干冰進行寄送，干冰消耗量為4-5kg/天（根據(jù)溫度會有所變動），訂購量以快遞實際運輸天數(shù)為準（避開大型節(jié)假日及線上購物節(jié)）。干冰采用厚實的泡沫箱進行打包，外側(cè)用透明膠封好；
② 樣本寄送我司時需填寫《項目送樣單》。送樣單中樣本信息、數(shù)量、分組與編號需與實際保持一致，紙質(zhì)版送樣單隨樣本寄出,電子版送樣單及寄送快遞單號發(fā)送給公司，以便核對及備份數(shù)據(jù)；
③ 在我司完成測序分析后，剩余樣本需要返還的項目，需在收到項目完整版結(jié)題報告3個月內(nèi)聯(lián)系我司進行樣本返還，逾期樣本將進行銷毀。如果樣本特別珍貴，需提前說明。樣本返回需要送樣方承擔返還費用（包括干冰費和快遞費）；
④ 為確保實驗的順利，送檢方需盡可能提供樣本，以防部分樣本降解重新取材、制備或送樣，耽誤檢測進程。
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